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細(xì)胞傳代的操作步驟

更新時(shí)間:2019-03-14  |  點(diǎn)擊率:1026

        喆圖小編今天來講講細(xì)胞傳代的操作步驟:需要準(zhǔn)備的器材:酒精噴壺、PBS緩沖液、胰酶、培養(yǎng)基、巴氏吸管、水浴鍋、移液器、離心管、超凈臺、CO2培養(yǎng)箱、離心機(jī)等。

        然后我們要把我們準(zhǔn)備的器材放入超凈臺,打開紫外殺菌燈滅菌,需要注意的是若培養(yǎng)的細(xì)胞對溫度比較敏感,將培養(yǎng)基瓶子放入37℃的水浴鍋中,使得培養(yǎng)基溫度在37℃,再轉(zhuǎn)移到超凈臺紫外滅菌,當(dāng)然一般的細(xì)胞對培養(yǎng)基的溫度不是很敏感,不用對培養(yǎng)基加溫也是可以的。細(xì)胞培養(yǎng)間也需要紫外照射半小時(shí)左右。

        接下來小編就開始來操作了,全程嚴(yán)格無菌操作!

        1、紫外照射滅菌后,穿好滅菌服,戴好滅菌手套和口罩。

        2、從CO2培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用酒精噴壺在培養(yǎng)瓶表面噴灑75%酒精消毒,轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶到超凈臺。

        3、打開蓋子,輕輕吸出舊的培養(yǎng)液,用巴氏吸管加入適量PBS緩沖液洗滌1-2次,棄去PBS緩沖液。

        4、可用移液器加入2-3ml胰酶,“十字”晃動,使胰酶充分接觸細(xì)胞。

        5、將加入胰酶的細(xì)胞培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到倒置顯微鏡載物臺,鏡下觀察細(xì)胞消化情況,當(dāng)細(xì)胞變圓且大量脫落時(shí),準(zhǔn)備終止消化,用75%的酒精噴灑培養(yǎng)瓶表面,轉(zhuǎn)移到超凈臺

        6、用移液器加入等量含血清培養(yǎng)基,終止消化。移液器充分吹打,使細(xì)胞能夠*脫落。

        7、將培養(yǎng)瓶中混合液體轉(zhuǎn)移至離心管中,配平,離心5分鐘左右。

        8、離心好后,用酒精噴壺噴灑離心管表面,轉(zhuǎn)移進(jìn)超凈臺,打開蓋子,將上清液倒入廢液缸。

        9、加入適量體積含血清培養(yǎng)基,用移液器或巴氏吸管輕輕吹打,制成細(xì)胞懸液。

        10、將細(xì)胞懸液分裝進(jìn)3個(gè)潔凈滅菌培養(yǎng)瓶,加入適量培養(yǎng)基,蓋好蓋子

        11、將分裝好的培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡載物臺,觀察細(xì)胞情況,細(xì)胞應(yīng)保證一定數(shù)量,數(shù)量太少會影響生長情況。

        12、在培養(yǎng)瓶上做記號,注明傳代時(shí)間,細(xì)胞種類,操作人員等信息。在放入CO2培養(yǎng)箱之前應(yīng)再次用酒精噴一噴培養(yǎng)瓶表面,然后整理操作臺,用75%酒精擦拭超凈臺臺面,清理廢液和垃圾。

        以上內(nèi)容僅供參考,如需了解請聯(lián)系喆圖客服!

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